酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒是酶免疫測定中廣泛應(yīng)用的技術(shù)。基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固體載體表面，使酶標記的抗原和抗體在固體表面反應(yīng)，并用洗滌法洗滌液相中的游離成分。通常使用ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。有兩種方法：雙抗體夾心法和間接法。前者用于檢測大分子抗原，后者用于檢測特異性抗體。
基本原理酶聯(lián)免疫吸附試劑盒法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合。這種組合不會改變抗體的免疫特性，也不會影響酶的生物活性。酶標記的抗體可以與吸附在固體載體上的抗原或抗體特異性結(jié)合。滴下底物溶液后，底物可以在酶的作用下將其氫供體從無色還原型變?yōu)橛猩趸停瑥亩l(fā)生顯色反應(yīng)。因此，相應(yīng)的免疫反應(yīng)可以通過底物的顏色反應(yīng)來確定。顯色反應(yīng)的深度與樣品中相應(yīng)抗體或抗原的量成比例。這種顯色反應(yīng)可以通過酶聯(lián)免疫吸附法定量測定，該法結(jié)合了酶聯(lián)化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性，使酶聯(lián)免疫檢測法成為一種特異、靈敏的檢測方法。
ELISA試劑盒操作步驟
1.確定本試驗所需的涂有抗體的酶標記板孔的數(shù)量。
2.將0.1ml多重稀釋的標準品依次加入一排7個孔中，僅加入樣品稀釋劑的孔作為對照。處理后，每孔加入100ul。
3.蓋上酶標記板，在37℃下反應(yīng)90分鐘。
4.反應(yīng)完成后，用自動洗板機吸收酶標板中的液體；或者抖掉酶標簽板上的液體，將其拍在吸水紙上。清洗兩次。
5.按每孔0.1ml的順序加入制備的生物素抗體工作溶液。37℃反應(yīng)60分鐘。
將6.0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡約1分鐘。
7.按每孔0.1ml的順序加入制備的ABC工作溶液。37℃反應(yīng)30分鐘。
將8.0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡約1-2分鐘。
9.每孔依次加入0.1ml TMB顯色工作液，在37℃黑暗中反應(yīng)。在反應(yīng)過程中，要經(jīng)常觀察。當標準的前3-4個孔具有明顯的藍色梯度，而最后3-4個孔沒有明顯差異時，添加0.1ml/孔TMB終止溶液。（顏色反應(yīng)不應(yīng)超過30分鐘）。
10.用酶標記物測量450nm處的O.D.值。
11.根據(jù)樣品的吸光度值在坐標上找到相應(yīng)的濃度。用戶還可以使用各種應(yīng)用程序進行計算。應(yīng)記住，樣品的實際濃度應(yīng)為×N
