豬瘟是中國(guó)主要的動(dòng)物疫病。我國(guó)對(duì)豬瘟的防控主要采取豬瘟疫苗免疫策略，抗體檢測(cè)是評(píng)價(jià)免疫效果的主要手段。目前，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織推薦的豬瘟抗體檢測(cè)方法為ELISA檢測(cè)法和熒光抗體中和試驗(yàn)。熒光抗體中和試驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)條件和操作人員要求高，耗時(shí)長(zhǎng)。它只適合專業(yè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)少量樣本，不適合推廣應(yīng)用。因此，可以說，ELISA是國(guó)際公認(rèn)的*適合大規(guī)模應(yīng)用的豬瘟抗體檢測(cè)方法。
在評(píng)估ELISA檢測(cè)方法時(shí)，兩個(gè)最重要的指標(biāo)是敏感性和特異性，兩者之間存在一定的矛盾。當(dāng)檢測(cè)方法的靈敏度高時(shí)，它必然會(huì)失去某些特異性；同樣，當(dāng)特異性要求高時(shí)，它必然會(huì)失去一些敏感性。因此，對(duì)于一個(gè)好的檢測(cè)方法，我們必須找到靈敏度和特異性的*平衡點(diǎn)和結(jié)合點(diǎn)。目前，用于豬瘟抗體檢測(cè)的ELISA方法主要有阻斷ELISA和間接ELISA兩種原理。阻斷ELISA使用單克隆抗體，因此檢測(cè)的特異性更高；間接ELISA更注重敏感性。
阻斷ELISA和間接ELISA在實(shí)際應(yīng)用中都是合理的。然而，鑒于我國(guó)豬瘟大規(guī)模強(qiáng)制免疫的現(xiàn)狀，如何在不同應(yīng)用領(lǐng)域選擇合適的試劑盒成為一個(gè)重要問題。因此，本文主要介紹了間接ELISA試劑盒與進(jìn)口阻斷ELISA試劑盒在臨床應(yīng)用中的比較研究，以幫助讀者在實(shí)際生產(chǎn)中選擇更合適的檢測(cè)試劑。
試劑盒開發(fā)原則的差異
阻斷試劑盒基于液相阻斷原理，反應(yīng)孔的顏色與血清中的抗體含量成反比。阻斷ELISA使用單克隆抗體檢測(cè)，可以大大提高檢測(cè)的特異性，但實(shí)際檢測(cè)對(duì)象僅針對(duì)具有單一表位的抗體（作為特異性抗體檢測(cè)）。因此，當(dāng)陽(yáng)性血清中針對(duì)該表位的抗體的豐度不高時(shí)，檢測(cè)的靈敏度會(huì)降低（會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果）。
間接試劑盒基于間接ELISA原理。反應(yīng)孔的顏色與反應(yīng)板中結(jié)合的特異性抗體的量成正比。因?yàn)殚g接ELISA檢測(cè)針對(duì)抗原蛋白的多克隆抗體（豬體內(nèi)的總抗體），它將提高檢測(cè)的靈敏度。
兩種試劑盒與熒光抗體病毒中和試驗(yàn)的符合率分析
熒光抗體病毒中和試驗(yàn)（FVNT）是OIE推薦的方法，也是檢測(cè)豬瘟抗體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。一項(xiàng)臨床試驗(yàn)表明，兩種ELISA抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果不同的283份血清樣本均通過FVNT法進(jìn)行了確認(rèn)和測(cè)試。結(jié)果表明，間接試劑盒與FVNT的符合率為69.26%，阻斷試劑盒與FVNT的符合率是28.62%。不符合樣品的確認(rèn)結(jié)果表明，直接試劑盒能夠更真實(shí)地反映接種后的中和抗體水平，而阻斷試劑盒對(duì)陽(yáng)性血清的檢測(cè)有明顯的遺漏。