將抗原呈遞細胞、抗原和抗原特異性T雜交瘤細胞混合并在96孔板中一起孵育。一段時間后，抗原呈遞的作用可以通過測量上清液中抗原特異性T雜交瘤細胞分泌的IL-2水平來反映。如果是可溶性抗原，可選擇DC作為APC；如果是顆粒抗原或脂質(zhì)包衣抗原，則應選擇巨噬細胞作為APC，所選APC應具有與T雜交瘤細胞相同的MHC結(jié)合特性。
主要試劑和設(shè)備
1.APC（此處選擇腹膜滲出細胞）、T雜交瘤細胞、抗原。
2.DMEM培養(yǎng)基，96孔平底培養(yǎng)板。
3.IL-2 ELISA試劑盒
4.離心機、CO2培養(yǎng)箱。
操作步驟
1.收集腹膜滲出細胞，用DMEM×106/ml將細胞濃度調(diào)節(jié)至2，加入96孔平底培養(yǎng)板中，每孔100μl
2.收集新鮮培養(yǎng)的T雜交瘤細胞，并在室溫下以1000rpm離心10分鐘。用預熱至37℃×106/ml的DMEM培養(yǎng)液將細胞濃度調(diào)節(jié)至2加入96孔培養(yǎng)板，每孔50μl
3.制備1mmol/L抗原工作液，用DMEM溶液連續(xù)稀釋，一般以對數(shù)（1:10）或半對數(shù)（1:3.16）稀釋為宜。
4.向96孔板中加入一系列稀釋的抗原溶液，每孔50μl每種濃度進行三次再穿孔，陰性對照不含抗原。
5.將96孔板置于37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中20~24小時。
6.取出96個孔板，以1200rpm離心10分鐘。
7.吸取上清液，在-80℃冷凍測試，或直接使用IL-2 Elisa試劑盒或細胞生物學方法檢測上清液中IL-2的含量。
注意事項
1.制備抗原溶液并進行連續(xù)稀釋時，應將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱中。
2.當合成肽用作抗原時，肽應溶解在去離子水中。1mmol/L工作溶液在4℃下可儲存數(shù)天。應避免將肽溶解在鹽水緩沖溶液中，因為鹽會導致肽沉淀。如果將蛋白質(zhì)用作抗原，可將蛋白質(zhì)直接溶解在DMEM培養(yǎng)基中以立即使用。
3.APC、抗原和T雜交瘤細胞可以以任何順序加入。